實(shí)驗原理
菌體在強堿性或者高溫條件下裂解,釋放出包括質(zhì)粒在內的核酸,蛋白等物質(zhì)。當 pH 恢復中性時(shí),共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA 復性快,而線(xiàn)性的染色體 DNA 復性緩慢,細菌蛋白質(zhì)、破裂的細胞壁和變性的染色體 DNA會(huì )相互纏繞成大型復合物,而后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用鉀離子取代鈉離子時(shí),復合物會(huì )從溶液中有效地沉淀下來(lái),離心除去變性劑后,就可以從上清中回收復性的質(zhì)粒DNA。
堿裂解法:
煮沸法:
實(shí)驗秘籍
對于實(shí)驗老手來(lái)說(shuō),提質(zhì)粒步驟已經(jīng)爛熟于心,但對于實(shí)驗小白的你,這份秘籍要收好了,有手就會(huì )!
經(jīng)典堿裂解法實(shí)驗步驟:
不同的下游實(shí)驗,如質(zhì)粒DNA疫苗、基因治療、免疫增強劑、CAR-T及用于對細胞的基因工程改造生產(chǎn)重組蛋白等生物醫藥產(chǎn)品,對質(zhì)粒的提取量和純度也會(huì )有所差別。