一看就會(huì )的質(zhì)粒抽提實(shí)驗步驟

欄目：技術(shù)服務(wù) 發(fā)布時(shí)間：2022-09-12
一看就會(huì )的質(zhì)粒抽提實(shí)驗步驟


實(shí)驗原理

菌體在強堿性或者高溫條件下裂解，釋放出包括質(zhì)粒在內的核酸，蛋白等物質(zhì)。當 pH 恢復中性時(shí)，共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒 DNA 復性快，而線(xiàn)性的染色體 DNA 復性緩慢，細菌蛋白質(zhì)、破裂的細胞壁和變性的染色體 DNA會(huì )相互纏繞成大型復合物，而后者被十二烷基硫酸鹽包蓋。當用鉀離子取代鈉離子時(shí)，復合物會(huì )從溶液中有效地沉淀下來(lái)，離心除去變性劑后，就可以從上清中回收復性的質(zhì)粒DNA。

堿裂解法：

煮沸法：

實(shí)驗秘籍

對于實(shí)驗老手來(lái)說(shuō)，提質(zhì)粒步驟已經(jīng)爛熟于心，但對于實(shí)驗小白的你，這份秘籍要收好了，有手就會(huì )！

 

經(jīng)典堿裂解法實(shí)驗步驟：


 

不同的下游實(shí)驗，如質(zhì)粒DNA疫苗、基因治療、免疫增強劑、CAR-T及用于對細胞的基因工程改造生產(chǎn)重組蛋白等生物醫藥產(chǎn)品，對質(zhì)粒的提取量和純度也會(huì )有所差別。


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