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TA克隆

欄目：技術(shù)服務(wù) 發(fā)布時(shí)間：2024-07-29
TA克隆

TA克隆

TA克隆技術(shù)（TA cloning）利用Taq聚合酶具有末端轉移酶（TdT）活性，但卻不具有3'-5'端外切酶校準活性的特點(diǎn)，可在PCR產(chǎn)物的3'端加上一個(gè)非模板依賴(lài)堿基“A”。pMD18-T是一種高效克隆PCR產(chǎn)物的專(zhuān)用載體，它是由pUC18載體在Xba I和Sal I識別位點(diǎn)間插入一個(gè)EcoR V位點(diǎn)，然后用EcoR V進(jìn)行酶切使質(zhì)粒線(xiàn)性化，并在它的3'端添加“T”構建而成。因其3'端帶有一個(gè)突出的“T”尾，能高效地與帶“A”尾的PCR產(chǎn)物連接，極大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR產(chǎn)物最簡(jiǎn)便、快捷的方法。

插入片段大小交貨周期價(jià)格(元)備注
< 800 bp5個(gè)工作日350元/個(gè)
800～2000 bp7個(gè)工作日請詢(xún)價(jià)

服務(wù)說(shuō)明

  • 請提供克隆片段的相關(guān)信息，包括名稱(chēng)，大小、樣品是否帶有”A”尾以及PCR產(chǎn)物是否已純化。

  • 已純化的PCR產(chǎn)物請確保使用的溶劑為滅菌的雙蒸水。

  • 請提供濃度≥20ng/μl,總體積≥50μl的PCR產(chǎn)物，所需DNA的總量會(huì )隨片段大小的不同而有所變化。

  • 請務(wù)必在訂單上注明PCR所用引物序列，以便用于克隆結果的核對分析。

  • 當克隆結果中包含合作伙伴提供的單項部分引物序列，我們即視實(shí)驗成功，將收取全額的實(shí)驗費用。

  • 若序列中包含高GC、Poly等特殊或復雜結構導致測序和中斷，我們即視實(shí)驗成功，將收取全額的實(shí)驗費用。

  • 項目完成一個(gè)月后，若合作伙伴無(wú)要求返還菌液或質(zhì)粒等，則我們將代為銷(xiāo)毀。

實(shí)驗步驟

鑒定樣品DNA片段長(cháng)度和濃度

1

加“A”尾（若PCR產(chǎn)物已帶“A”尾則跳過(guò)此步）

2

PCR產(chǎn)物和pMDI8-T載體連接

3

轉化并篩選重組子

4

重組子測序

5

測序結果分析

6



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