一.DNA克隆簡(jiǎn)介

DNA克隆是基因工程研究中最基本的操作之一。簡(jiǎn)單地講，就是將外源基因與克隆載體進(jìn)行體外連接，然后再轉化到宿主菌中進(jìn)行克隆、篩選，以此獲得質(zhì)粒重組體。 

二.服務(wù)要求

1. 提供外源DNA的來(lái)源及背景資料。DNA來(lái)源包括：PCR擴增產(chǎn)物，RT-PCR擴增產(chǎn)物，從其他質(zhì)粒上酶切得到的DNA片段等。 

2. 如DNA為PCR產(chǎn)物，請提供DNA片段的電泳照片，并請標明Marker及其濃度。  

3. 注明克隆使用的酶切位點(diǎn)。 

4. 如果為商品化載體，請提供生產(chǎn)廠(chǎng)家及標準名稱(chēng)，如果所提供載體是您構建的，請注明多克隆位點(diǎn)、抗性、分子量等資料。 

5. 實(shí)驗中使用氨芐、青霉素、卡那霉素、四環(huán)素以外的抗生素時(shí)，抗生素需您提供。 

6. 您自己提供的引物如果為干品，請標明具體的OD數，如果為液體狀態(tài)，請標明具體濃度。 

7. 可用甘油菌和穿刺菌的形式郵寄菌體（最好同時(shí)提供相應質(zhì)粒），如果提供質(zhì)粒則質(zhì)粒的量最好在4μg以上；如果提供的是PCR產(chǎn)物，則PCR產(chǎn)物量最好在5μg以上（最好附有電泳照片）。

三.操作程序

1. 通過(guò)代理商或直接和公司聯(lián)系，同時(shí)提供詳細的背景資料，實(shí)驗要求等。代理商或公司經(jīng)過(guò)研討后將和您取得聯(lián)系，協(xié)商確定實(shí)驗方案，并告知您具體的服務(wù)價(jià)格，我們將簽訂合同，在收到您試驗材料后，立即開(kāi)始實(shí)驗。 

2. 如果您需要我們進(jìn)行PCR擴增時(shí)，我們會(huì )采用高保真DNA聚合酶進(jìn)行PCR反應，但不承諾測序結果與參考序列完全一致。

3. 如果克隆后的質(zhì)粒需要測序反應，請將標準參考序列的電子版資料提供給我們。 

4. 在完成DNA克隆和測序等工作后，我們將為您提供一套完整的實(shí)驗結果，其中包括：實(shí)驗操作說(shuō)明、引物、克隆構建的質(zhì)粒及含該質(zhì)粒的菌體（穿刺菌）、測序結果堿基序列圖和測序彩色峰形圖。 

5. 一般情況下普通載體的克隆需10天左右時(shí)間。

四.收費標準

1. 普通載體（如pUC系列、pBluescript ll系列、T載體系列、pGEM系列等）與其他特殊載體（如pET系列、pGEX系列、pLNCX 系列、pQE系列、pBR系列等）在克隆時(shí)難易程度相差很大，不同的DNA片段的克隆情況也各不相同，因此DNA片段的克隆服務(wù)收費標準不一樣。一般來(lái)說(shuō)，單就克隆操作這一步驟而言的收費標準在600～1500之間，具體情況請詢(xún)價(jià)。  

2. 多表達框、多拷貝數質(zhì)粒構建過(guò)程相對復雜，具體收費標準請與公司基因工程師直接談。

五.克隆服務(wù)的種類(lèi)

1、PCR產(chǎn)物的TA克隆。 

2、PCR產(chǎn)物克隆到非T載體。

3、注明克隆使用的酶切位點(diǎn)以及是否需要平端連接等。

4、各種載體中元件的修改。

5、原核、真核表達載體的構建。