微衛星(microsatellite analysis)即短串聯(lián)重復序列(Short tandem repeat,STR),是由幾個(gè)堿基對作為核心單位,串聯(lián)重復形成的一類(lèi)DNA序列,由于核心單位重復數目的變化,構成了STR基因座的遺傳多態(tài)性。由于其序列簡(jiǎn)短 , 通過(guò) PCR 很容易從基因組 DNA 中特異性地擴增出來(lái) , 大大簡(jiǎn)化了微衛星多態(tài)性分析的操作。研究者只需在目標基因座設計一對或多對引物 , 通過(guò) PCR 反應從模板 DNA 中將該基因擴增出來(lái) , 然后使用測序儀進(jìn)行電泳分離分析即可。它具有分布廣泛,易于檢測,信息量大,有高度多態(tài)性并遵循孟德?tīng)柟诧@性遺傳等優(yōu)點(diǎn)。目前STR分析已廣泛應用于遺傳制圖、連鎖性分析、親子鑒定、疾病基因定位和物種多態(tài)性研究等諸多領(lǐng)域。
一 、分型原理
利用熒光標記的PCR引物對多個(gè)微衛星多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行擴增,然后采用高分辨率膠電泳(如用于測序的毛細管電泳等)對擴增片斷進(jìn)行分離,通過(guò)熒光檢測系統(如ABI測序儀)確定擴增片斷的長(cháng)度,實(shí)現對微衛星多態(tài)位點(diǎn)的分型。
我公司采用ABI 3730測序儀對STR進(jìn)行精確的DNA片段分析,提供完整解決方案:
實(shí)驗方案的設計, 包括熒光標記的選擇,引物的設計、合成和標記,內標的選用等等;
完成熒光 PCR ,并在測序儀上完成電泳掃描 , 數據采集;
用專(zhuān)業(yè)軟件對分型數據進(jìn)行處理分析 , 提供產(chǎn)物片段大小、數量多少的信息數據;
我們最終提供微衛星座位PCR產(chǎn)物全自動(dòng)檢測及分型結果。
二、 客戶(hù)提供
1)基因組DNA:至少100 ng 樣品(每個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)需樣品3-5 ul,濃度為30~50 ng/ul);樣品最好溶解在ddH2O中,如果不是,請注明其成分以及可能殘留的抑制劑類(lèi)型。
2)PCR產(chǎn)物:特異性好。
3)如需設計引物,請提供目的片段序列或者微衛星檢測位點(diǎn),引物設計好后需客戶(hù)確認。
三、 實(shí)驗步驟
客戶(hù)提供血液樣本或DNA樣本——確定STR位點(diǎn),設計合成特異PCR擴增引物(熒光標記引物)——進(jìn)行PCR擴增,通過(guò)測序儀電泳檢測,獲得擴增片段相關(guān)數據——ABI3730XL 測序儀讀出擴增片段大小信息。
四 、收費標準
定區域位點(diǎn)的掃描
普通引物:1.50元/堿基
引物費用:我們推薦的熒光標記有FAM 、 HEX 、 NED 等,合成費用查詢(xún)合成報價(jià)
PCR費用:20元/樣本,包括預實(shí)驗和檢測。
分型費用:如果您已經(jīng)完成 PCR 擴增,只需要進(jìn)行電泳分型、數據處理,包含內標價(jià)格為 10元 / 樣本。不包含內標價(jià)格為 8元 / 樣本,不足 96 個(gè)的按照 96 個(gè)收費。