DNA甲基化是最早發(fā)現的修飾途徑之一,真核生物中甲基化僅發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉移酶(DNMTs)的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶轉變?yōu)?’-甲基胞嘧啶。大量研究表明,DNA甲基化能引起染色質(zhì)結構、DNA構象、DNA穩定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達。DNA甲基化通常抑制基因表達,去甲基化則誘導了基因重新活化和表達,這種DNA修飾方式在不改變基因序列的前提下實(shí)現對基因表達的調控。BSP(Bisulfite Sequencing PCR,BSP)克隆測序法,是目前甲基化檢測的金標準。
BSP實(shí)驗原理:
用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變;隨后再CpG島兩端設計引物進(jìn)行PCR,將目的產(chǎn)物純化后進(jìn)行TA克隆,每個(gè)克隆挑取陽(yáng)性克隆測序,最后將測得的序列與原始序列比對,統計甲基化位點(diǎn)及數量,并分析甲基化程度。
服務(wù)特點(diǎn):
1、克服了MSP只能作定性研究,可做定量研究;
2、敏感性高,待測DNA中5-甲基胞嘧啶分布極不均衡也可檢測;
3、只要客戶(hù)提供基因名稱(chēng)或序列,我們免費設計引物;
4、周期快:2周出結果。