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真核有參轉錄組測序

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真核有參轉錄組測序

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

指利用高通量測序技術(shù)進(jìn)行cDNA測序，全面快速地獲取某一種特定器官或組織在某一狀態(tài)下的幾乎所有轉錄本。目前轉錄組測序產(chǎn)品有真核有參轉錄組測序、真核無(wú)參轉錄組測序和原核轉錄組測序。

技術(shù)線(xiàn)路

福爾馬林固定石蠟包埋。

送樣要求：新鮮FFPE組織切片，厚度不超過(guò)10um（過(guò)厚會(huì )導致RNA得率低），每次用量大約8片，表面積不超過(guò)250mm²。

常溫運輸保存。

分析內容

圖1 樣品相關(guān)性檢驗

圖2 基因差異表達火山圖

圖3 不同組間的差異

圖4 基因有向無(wú)環(huán)圖

常見(jiàn)問(wèn)題

簡(jiǎn)述真核轉錄組常規建庫流程
1）通過(guò)磁珠和mRNA的polyA結構將mRNA分離出來(lái)；
2）mRNA片段化；
3）mRNA反轉錄為雙鏈結構，第二鏈cDNA合成時(shí)，其中的堿基T，被替換成U，從而達到鏈特異性文庫的目的；
4）5’末端修復、3’末端加A；
5）加接頭；
6）選擇特異長(cháng)度回收，一般為300bp；
7）PCR；
8）上機測序。
如何對得到的數目較多的差異基因進(jìn)行后期驗證？
首先根據GO或者KEGG富集結果，或者客戶(hù)關(guān)注的基因，選取有代表性的進(jìn)行qRT-RCR驗證。然后根據RPKM值，選擇RPKM值差異倍數答，同時(shí)p值小的基因進(jìn)行qRT-RCR驗證。

上一個(gè)：原核轉錄組測序

下一個(gè)：真核無(wú)參轉錄組測序

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電話(huà)：0532-89960003 (測序） 0532-67762873（合成）
郵箱：qingdao@psnbio.com

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